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cytoskeleton AKL95-B說明書

 發(fā)布時(shí)間:2018/8/17 點(diǎn)擊量:571

Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎(chǔ)研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,我們還在產(chǎn)品線中為微管,微管蛋白,運(yùn)動(dòng)蛋白,小G蛋白效應(yīng)物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

 

結(jié)合蛋白質(zhì)

· 概述

· 關(guān)于

· CITATIONS

· 常見問題解答

 

測定所有肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP)以確保其活性與公布的值相當(dāng)。測定因產(chǎn)品而異,包括F-肌動(dòng)蛋白切斷測定,F(xiàn)-肌動(dòng)蛋白激活的ATP水解和肌動(dòng)蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結(jié)構(gòu)域蛋白在肌動(dòng)蛋白聚合中的作用(右)。

 

Cytoskeleton,Inc。銷售一系列純化的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白都具有高純度,并經(jīng)過嚴(yán)格的生物活性測試。細(xì)胞骨架還為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白研究提供肌動(dòng)蛋白,抗體和試劑盒。

由Arp2 / 3和WASP VCA結(jié)構(gòu)域刺激的肌動(dòng)蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3(Cat。#RP01)和WASP VCA(Cat。#VCG03)結(jié)構(gòu)域?qū)?dòng)蛋白聚合的影響

肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用
*,F(xiàn)-和G-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用(14)??。目前有超過150種已知的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP),其占細(xì)胞蛋白的約25%。ABP在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上賦予大量功能多樣性,其涉及諸如肌肉收縮,唇形突破,細(xì)胞運(yùn)動(dòng),胞質(zhì)分裂和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的過程。研究這些過程如何調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲功能和動(dòng)力學(xué)是一個(gè)重要且不斷增長的研究領(lǐng)域。

可以通過使用生物化學(xué),遺傳學(xué)和免疫學(xué)方法分離和研究肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。因?yàn)榇嬖诔^50種類型的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動(dòng)蛋白親和柱通常用于親和純化ABP,無論它們是F-或G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合。可以通過利用芘肌動(dòng)蛋白熒光的聚合增強(qiáng)來進(jìn)行顯示潛在ABP影響肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)的簡單測定(參見測量肌動(dòng)蛋白聚合物部分)。這種性質(zhì)的研究有助于鑒定新的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。有幾篇值得一讀的關(guān)于識(shí)別和量化新肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的可能方法的評(píng)論(15,16,17)?

問題1:哪種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP)可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合對(duì)照? 

答案1:肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白α-輔肌動(dòng)蛋白(Cat。#AT01)是一種F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合和交聯(lián)蛋白,使其可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合研究的對(duì)照。它的Kd是1μM,這意味著在該濃度下發(fā)生50%結(jié)合。因此,我們的目標(biāo)是使用 2μM的α-肌動(dòng)蛋白作為結(jié)合測定中的陽性對(duì)照。在結(jié)合反應(yīng)中,2μM濃度的α-輔肌動(dòng)蛋白相當(dāng)于0.23μg/μl。此外,α-輔肌動(dòng)蛋白對(duì)pH敏感,其高親和力發(fā)生在pH 7.0。

 

問題2:Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動(dòng)蛋白活力? 

答案2:遺憾的是,我們不會(huì)出售運(yùn)動(dòng)級(jí)肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制測試非常難以復(fù)制,因此我們無法充分確保試劑的質(zhì)量。因此,肌球蛋白(Cat。#MY02MY03)和重型meromyosin蛋白(Cat。#MH01)不推薦用于F-肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)測定。已經(jīng)測試過這些試劑的客戶在運(yùn)動(dòng)方面沒有取得很好的成功,因此我們不建議購買樣品進(jìn)行測試。如果需要運(yùn)動(dòng)級(jí)肌動(dòng)蛋白或重型meromyosin,我們建議遵循原始方案(Kron和Spudich,1985)并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩(wěn)定性。

    參考文獻(xiàn):  SJ Kron和JA Spudich,1985年。熒光肌動(dòng)蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動(dòng)。PNAS,83,6272-6276。

 

結(jié)合蛋白質(zhì)系列產(chǎn)品:

 

PHDG1

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH1

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN1

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK001

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK003

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL95

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD99

Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS99

Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL99

Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF99

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP05

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

PHDG2

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH2

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN2

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK005

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK007

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL96

Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD100

Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS100

Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL100

Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF100

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP06

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

PHDG3

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH3

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN3

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK009

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK011

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL97

Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD101

Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS101

Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

 

肌動(dòng)蛋白(純度> 95%):兔骨骼肌

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

 

1x1毫克(Cat。#AKL95-B)

5x1 mg(Cat。#AKL95-C)

產(chǎn)品用途包括

· 肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的鑒定和表征

· 體外肌動(dòng)蛋白聚合研究

· Western印跡分析的抗體標(biāo)準(zhǔn)


從兔骨骼肌中純化出肌動(dòng)蛋白材料。 AKL99肌動(dòng)蛋白純度大于99%,AKL95純度大于95%。肌肉肌動(dòng)蛋白的分子量約為43kDa。兔肌肉肌動(dòng)蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質(zhì)在4℃下干燥至<10%濕度時(shí)保存6個(gè)月。當(dāng)再 在蒸餾水中構(gòu)成為10毫克/毫升,該蛋白質(zhì)是在以下緩沖液:5mM的的Tris-HCl pH 8.0中,0.2毫米氯化鈣2,0.2mM的ATP,5%蔗糖和1%的葡聚糖。

純度
通過在12%聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測定法測定純度。AKL99由> 99%純肌肉肌動(dòng)蛋白組成,而AKL95純度> 95%(見圖1)。

 

 

 


圖1:圖1.兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白的純度。在SDS-PAGE凝膠上運(yùn)行100μg> 99%純(AKL99)和> 95%純(AKL95)兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白,并用考馬斯藍(lán)染色。箭頭表示肌動(dòng)蛋白,箭頭表示α-肌動(dòng)蛋白污染物(115kDa)。純化的肌動(dòng)蛋白中的微量雜質(zhì)主要是肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,例如α-肌動(dòng)蛋白和凝溶膠蛋白。

 

生物活性
肌肉肌動(dòng)蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長絲(F-肌動(dòng)蛋白)的能力和在旋轉(zhuǎn)分析中與未聚合組分分離的能力決定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保AKL99產(chǎn)生> 90%的F-肌動(dòng)蛋白,AKL95在該測定中產(chǎn)生> 80%的F-肌動(dòng)蛋白。

 

問題1:儲(chǔ)存肌動(dòng)蛋白的*方法是什么,以確保大的穩(wěn)定性和保質(zhì)期?

答案1:   細(xì)胞骨架提供我們所有的肌動(dòng)蛋白作為凍干粉末,以便它們可以在室溫下運(yùn)輸。收到后,凍干粉末應(yīng)在4℃下儲(chǔ)存在帶有干燥劑的密封容器中。重要的是監(jiān)測干燥劑的新鮮度并確保其繼續(xù)吸收水分以保護(hù)凍干的肌動(dòng)蛋白。妥善儲(chǔ)存后,凍干肌動(dòng)蛋白保證自購買之日起6個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。或者,肌動(dòng)蛋白可立即以推薦的濃度重新懸浮,等分,在液氮中快速冷凍并儲(chǔ)存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩(wěn)定6個(gè)月。解凍冷凍等分試樣時(shí),重要的是在室溫水浴中解凍。

 

問題2:聚合后儲(chǔ)存F-肌動(dòng)蛋白的*方法是什么?

答案2:   G-肌動(dòng)蛋白在4°C下穩(wěn)定2天,需要二價(jià)陽離子,pH 6.5 - 8.0和ATP穩(wěn)定性。F-肌動(dòng)蛋白是穩(wěn)定的,可以在4°C下儲(chǔ)存1-2周。F-肌動(dòng)蛋白需要ATP(0.2mM)和Mg2 +(2mM)的穩(wěn)定性,并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩(wěn)定的。F-肌動(dòng)蛋白對(duì)冷凍不穩(wěn)定。F-肌動(dòng)蛋白可以轉(zhuǎn)移到各種緩沖液(例如HEPES,磷酸鹽等)而沒有不利影響。我們建議在4°C下儲(chǔ)存F-肌動(dòng)蛋白時(shí),添加抗菌劑,如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素。

 

Mohammad等,2012。Flightless I是一種粘附相關(guān)的肌動(dòng)蛋白加帽蛋白,可調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移。FASEB?。doi:10.1096 / fj.11-202051。

Reay等,2012。核因子κB抑制對(duì)血清型9腺相關(guān)病毒(AAV9)微小肌營養(yǎng)不良蛋白基因轉(zhuǎn)移至mdx小鼠的影響。摩爾。醫(yī)學(xué)。v 18 pp 466-476。

Windhorst等,2011。肌醇-1,4,5-三磷酸-3-激酶-A對(duì)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的功能作用。詮釋。J.癌癥。第129卷,第1300-1309頁。

Arora等,2004。凝溶膠蛋白通過rac依賴性步驟介導(dǎo)膠原蛋白吞噬作用。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞。第15卷,第588-599頁。

Ishikawa等,2004。來自低溫電子顯微鏡的棘阿米巴肌球蛋白IC尾的子域組織。PROC。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國。第101卷,第12189-12194頁。

Balcer等,2003。通過高分子量Srv2 / CAP復(fù)合物,cofilin,profilin和Aip1協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲轉(zhuǎn)換。CURR。生物。第13卷,第2159-2169頁。

Loomis等,2003.Espin交聯(lián)導(dǎo)致體內(nèi)微絨毛型平行肌動(dòng)蛋白束的延長。J. Cell Biol。第163卷,第1045-1055頁。

Upadhyaya等,2003。通過使用肌動(dòng)蛋白推進(jìn)的脂質(zhì)囊泡探測聚合力。PROC。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國。第100卷,第4521-4526頁。

Humphries等,2002。通過肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白冠狀蛋白直接調(diào)節(jié)Arp2 / 3復(fù)合物的活性和功能。J. Cell Biol。第159卷,第993-1004頁。

Sagot等,2002。由Bni1和profilin介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白成核機(jī)制。納特。細(xì)胞生物學(xué)。第4卷,第626-631頁。

Engqvist-Goldstein等,2001。肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Hip1R在胞吞作用的早期階段與網(wǎng)格蛋白結(jié)合并在體外促進(jìn)網(wǎng)格蛋白裝配。J. Cell Biol。第154號(hào),第1209-1223頁。

 

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

品牌

BK165-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK165

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK163-S

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK163

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK160-S

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK160

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK162-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK162

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK161-S

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK161

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

AAC04-Beads

Acetyl-Lysine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM11-Beads

SUMOylation 1 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM24-Beads

SUMOylation 2/3 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

UBA01-Beads

Ubiquitination Affinity Beads

ea

cytoskeleton

CIG02-Beads

Acetyl-Lysine Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG03-Beads

SUMO1 IP Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG01-Beads

IgG Control Beads

ea

cytoskeleton

CUB02-Beads

Ubiquitination Control Beads

ea

cytoskeleton

BLR01

BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

ea

cytoskeleton

BLR02

BlastR™ Rapid Filtration Kit

ea

cytoskeleton

AAC02

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

ea

cytoskeleton

AAC03

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC03-HRP

Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC01

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

ea

cytoskeleton

APY03

Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

APY03-HRP

Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

ASM01

SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

ea

cytoskeleton

ASM24

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

ea

cytoskeleton

ASM23

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

ASM23-HRP

SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

AUB01

Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

AUB01-HRP

Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

PHDG1

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH1

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN1

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK001

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK003

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL95

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD99

Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS99

Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL99

Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF99

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP05

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

APHR

Actin protein (rhodamine): human platelet

ea

cytoskeleton

AR05

Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AT01

Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

RP01P

Arp2/3 protein complex: porcine brain

ea

cytoskeleton

CS-TFC01

Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

ea

cytoskeleton

CF01

Cofilin 1 protein: human recombinant

ea

cytoskeleton

HPG6

Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

ea

cytoskeleton

MH01

Heavy meromyosin protein

ea

cytoskeleton

CS-MH03

Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

ea

cytoskeleton

CS-MYS03

Myosin - cardiac S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS04

Myosin - skeletal muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS05

Myosin - smooth muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

MY02

Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

MY03

Myosin protein: bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

PR02

Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

ea

cytoskeleton

PHDR1

Rhodamine Phalloidin

ea

cytoskeleton

CY-SC001

SiR-Actin Kit

ea

cytoskeleton

CY-SC013

SiR700-Actin Kit

ea

cytoskeleton

VCG03

WASP protein VCA domain: GST tagged: human

ea

cytoskeleton

 

 

 

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商

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7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。

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